FACSAria™ IIIu (EFRE-Förderung)
Fluoreszenz-aktivierte Zellsortierung (FACS)
Fluoreszenz-aktivierte Zellsortierung (FACS) ermöglicht die physikalische Separierung von Zellen und Partikeln in einer Größenordnung von 0,2 μm bis maximal 30 μm aufgrund ihrer Lichtbrechungs- bzw. Fluoreszenzeigenschaften. Es können pro- und eukaryotische Zellen bzw. Zellbestandteile oder synthetische Partikel aus einer heterogenen Population identifiziert und entsprechend den Eigenschaften der Zielpopulation sortiert werden. Im Allgemeinen wird die Fluoreszenzmarkierung mit Antikörpern gegen das zu untersuchende Zielmolekül, i.d.R. Proteine, vorgenommen, wobei die Lokalisierung des Zielmoleküls an der Zelloberfläche oder intrazellulär sein kann. Fluoreszierende Substanzen, z.B. für allgemeine DNA- bzw. Protein-Färbung können ebenfalls detektiert werden.
Geräteeigenschaften und technische Spezifikationen
Die Serie der FACSAria™-Durchflusszytometer von Becton Dickinson (BD) sind Hochgeschwindigkeits-Zellsortierer zur Messung und Sortierung von Zellen oder Partikeln. Die bisherige Konfiguration des FACSAria™II mit drei Lasern; blau (488 nm), lila (405 nm) und rot (633 nm), ermöglichte die Detektion von bis zu 9 Fluoreszenzparametern. Durch das EFRE-geförderte Upgrade auf den Stand eines FACSAria™IIIu ist es allen Nutzern der Core Facility möglich, bis zu 16 Parameter simultan zu messen. Der Einbau eines grünen Lasers (561 nm) und der damit verbundenen neuen, für vier Laserlinien optimierten Flusszelle, können alternative Fluorochrome, wie Cy3 und mCherry, aber auch Fluorochrome, die bisher durch den blauen Laser nicht maximal angeregt wurden, wie z.B. PE und PE-Tandemfarbstoffe, verwendet werden.
- Vier Laser: violet (405 nm), blau (488 nm), gelb/grün (561 nm), rot (633 nm).
- Nozzle-Größen: 70 µm, 85 µm, 100 µm, 130 µm (max. Partikelgröße ca. ¼ des Nozzle-Durchmessers).
- Temperatur-Kontrolle der Ausgangsprobe: 4 °C, 20 °C, 37 °C, 42 °C.
- Temperierung der sortierten Zellen bei Sortierung auf Platten.
- FACSDiva™ Software 8.0, ermöglicht Index-Sorting.
- Bis zu 70.000 Ereignisse pro Sekunde können aufgenommen werden.
- Bis zu 1 Mio. Zellen können pro Minute sortiert werden.
- Bis zu 14 Fluoreszenzkanäle können simultan gemessen werden.
- Sortierung in 15ml-Falcon-Röhrchen (2-Wege-Sortierung), in 5ml-FACS-Röhrchen (4-Wege-Sortierung), in 1,5ml und 1,0ml-Tubes, in 6-, 12-, 48-, 96-Well-Platten und auf Glas-Objektträger möglich.
- Optisches System individuell veränderbar, aktuelle Konfiguration siehe Tabelle.
Akquisitions- und Analyse-Software
- BD FACSDiva™ v.8.0.2
Konfiguration
| Laser | Laser Excitation | Parameter | Detector | Filter |
| 1 | Rot (633 nm) | APC-Cy7, APC-H7, APC-Vio770 | A | 780/60, 735 LP |
| AlexaFluor700, APC-R700 | B | 730/45, 690 LP | ||
| APC, AlexaFluor647, Cy5 | C | 660/20 | ||
| 2 | Gelbgrün (561 nm) | PE-Cy7 | A | 780/60, 735 LP |
| PE-Cy5, 7-AAD, mPlum | B | 670/14, 630 LP | ||
| PE-TexasRed, PI, mCherry | C | 610/20, 600 LP | ||
| PE, DsRed, Cy3 | D | 582/15 | ||
| 3 | Blau (488 nm) | PerCP-Cy5.5, PerCP, BB700 | A | 695/40, 655 LP |
| FITC, GFP/YFP, AlexaFluor488 | B | 530/30, 502 LP | ||
| SSC | C | 488/10 | ||
| 4 | Violet (405 nm) | BV786 | A | 780/60, 750 LP |
| BV650, Qdot655 | B | 660/20, 630 LP | ||
| BV605, Qdot605 | C | 616/23, 595 LP | ||
| BV510, V500, AmCyan, Aqua L/D | D | 530/30, 502 LP | ||
| DAPI, BV450, Hoechst | E | 450/40 |
Applikationen
- Phänotypisierung eines Zellgemisches
- Zellzyklusanalyse, Viabilität und Apoptose-Nachweis
- Cytometric Bead Array (CBA) für Zytokinmessungen
- Phosh-Flow für Messung von Kinase-Aktivitäten
- FISH, FRET und BRET kombiniert mit Durchflusszytometrie
- Sortierung von Zellen für
- Isolation von DNA, RNA, Proteinen, etc.
- Kultivierung zur weiteren funktionellen Charakterisierung bestimmter Zelltypen
- Co-Kultur verschiedener Zellen (hier Sortierung direkt in Zellkulturgefäß)
- Transfusion und Transplantation von Zellen (Mausmodelle)
- Aufreinigung transfizierter bzw. transduzierter Zellen (Homogene Populationen), e.g. GFP/ YFP
- Sortierung von Bakterien
- Einzelzellsortierung (Klonierung, Sequenzierung)